His标签蛋白纯化的挑战与新进展

His标签是为重组蛋白纯化而精心设计的一种标签，通常由6到10个组氨酸残基构成。由于其分子量较小，对目标蛋白的性质影响有限，因而成为当前应用最广泛的纯化标签。在His标签的蛋白纯化中，标签与金属离子之间的结合强度是决定成功与否的核心因素。这一过程受到多种因素的影响，例如金属离子如Ni的配位情况、标签的长度和位置（C端或N端）、标签的暴露程度，以及缓冲液的pH值等。在实际操作中，常常会出现标签蛋白结合柱的强度不足，导致大量流失，从而影响目标蛋白的纯度与收率，甚至可能导致目标蛋白完全不结合的情况。

新型镍亲和纯化介质的应用

针对传统Ni亲和介质在处理His标签蛋白时存在的挂柱弱和大量流失等问题，PG电子推出的VDXNTANiultra纯化介质展现了优异的性能，特别适用于这些挑战。

实验材料与方法

在相同的实验条件下，采用传统的Ni-NTA介质与VDXNTANiultra对同一标签蛋白进行了纯化。实验结果显示，使用传统Ni-NTA时，在结合和洗杂过程中均出现了大量目标蛋白的损失，这显著降低了目标蛋白的回收率。而另一方面，VDXNTANiultra对目标蛋白的结合能力更强，结合及洗杂过程中的蛋白损失显著减少，回收率明显高于传统的Ni-NTA介质。

层析条件

- 层析柱：VDXNTANiultra与传统Ni-NTA
- 柱体积：5mL，柱高：10cm
- 样品来源：大肠杆菌裂解液
- 平衡液配方：50mM PB，300mM NaCl，pH 8.0
- 洗脱液配方：50mM PB，300mM NaCl，500mM咪唑，pH 8.0
- 流速：1mL/min

总结

在His标签蛋白的纯化过程中，选择合适的介质至关重要。PG电子的VDXNTANiultra为解决传统方法中的诸多问题提供了可靠的解决方案，提升了纯化效率，为生物医疗领域的研究和应用带来了新的可能。