编者按：近年来，斑马鱼Crispant技术在基因编辑领域取得了重要突破，凭借其高效性、低成本及易操作性，成为疾病机制研究、药物筛选及功能基因组学的理想工具，未来在精准治疗中潜力巨大。Crispant技术利用CRISPR/Cas9技术，通过将Cas9蛋白和靶点gRNA混合（RNP）注射到斑马鱼的1细胞期，生成F0代敲除嵌合体斑马鱼，以便直接进行表型观察和基因功能研究。

Crispant技术的优势

Crispant相比于m啡啉介导的基因敲降技术，具有以下显著优势：

1. 研究周期短：最短2周内可观察到胚胎期的表型，通常在4周内即可提供靶点效率验证的完整研究报告。
2. 可在斑马鱼发育的任何时间段观察表型：与m啡啉在胚胎发育过程中逐渐降低的作用不同，Crispant在基因组水平进行基因编辑，表型观察能持续至成鱼阶段。
3. 低毒副作用：m啡啉可能导致毒副作用，Crispant体系则通过一次设计和筛选获得多个高效及特异的靶点，从而降低了毒副作用，并可以实现基因的完全敲除。
4. 可同时敲降多个目标基因：Crispant能够针对多个基因进行敲降，避免了两种m啡啉同时使用导致的致死和非特异性表型问题。
5. 便于后续稳定品系构建：Crispant筛选到的靶点能够直接用于构建稳定敲除的斑马鱼品系，从而节省了时间和成本。

应用场景

通过多重sgRNA协同编辑及F0代表型直筛，Crispant技术显著缩短了基因功能研究的周期至传统方法的1/5，成本降低超50%。其高效性、低成本和易操作性，使其成为疾病模型构建、基因功能解析和药物筛选的理想选择。

1. 疾病模型构建：已有研究利用Crispant技术构建癫痫模型，通过敲除irf2bpl或cars2基因，模拟患者抽搐表型，用于抗癫痫药物筛选。
2. 基因功能解析：通过敲除kctd10基因，已成功诱导心脏线性畸形，推动心脏发育研究；同时通过rfx6基因的敲除，诱导糖尿病样表型，用于胰腺功能研究。
3. 药物筛选：已有实验通过敲除斑马鱼的cars2、Sigirr、cbsb基因，引发相关表型，应用于神经系统疾病、免疫调节等领域的药物筛选。

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