## 产品及特点

本产品是基于探针法荧光定量PCR原理研发的检测试剂盒，具有以下特点：

1. 即开即用，用户只需提供样品DNA模板。
2. 通过优化，引物等组分具备高灵敏度。
3. 提供阳性对照，便于有效排除假阴性结果。
4. 具高特异性，引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区，确保不会与其他生物样本的DNA发生交叉反应。
5. 既可用于定性检测，也可进行定量检测，定量检测的线性范围至少可达5个数量级。
6. 本产品足以支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 本产品仅限于科研用途。

## 方法指南

### 一、DNA提取（样本制备区）

{在此步骤中}用户可选择任意方法提取和纯化样品DNA，本试剂盒与市场上的大多数核酸提取试剂盒相兼容。

### 二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

（因阳性对照浓度较高，请在独立区域进行以下稀释操作，避免污染样品或本试剂盒的其他成分）：
1. 准备6个离心管，标记为7、6、5、4、3、2。
2. 向每个离心管中加入45μL DEPC-H2O，推荐使用带芯枪头。
3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品并且放置于冰上待用。
4. 依次通过更换枪头，在6号、5号管中继续稀释，依次得到1×10E6和1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。
5. 重复以上操作，直到获得6个不同稀释度的标准曲线样品，如不需制作标准曲线，可将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL即可。

### 三、试剂配制（试剂准备区）

若待检样品数量为N，则准备N+2个qPCR管（N个样品+1个阴性对照+6个阳性对照），向各PCR管中加入相应成分（详细说明可向我司索取）并转移至样本准备区。

### 四、添加模板（模板添加区）

向各qPCR管中添加2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

### 五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放置于PCR扩增仪器样品槽中进行扩增，扩增程序可参考详细说明（可向我司索取）。

### 六、结果分析

1. 若制作标准曲线，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴绘制标准曲线，并根据待测样品的Ct值推算出样品DNA浓度的log值。
2. 若未制作标准曲线，结果可参考以下标准进行判定：
- 阳性对照：Ct值<30，具明显指数增长，呈典型S型曲线。
- 阴性对照：Ct值≥38或无Ct值，无明显指数增长。
- 样本检测结果：Ct值<35，指数增长，结果为阳性；Ct值≥38或无Ct值，表明未检测到样本，结果为阴性；Ct值在35-38之间，需进行重复实验，以确认样本阳性或阴性。

## 运输及保存

请低温运输，保存于-20℃，有效期为一年。阳性对照需单独存放，避免与其他试剂交叉污染。PG电子作为领先的生物医疗品牌，致力于提供高品质、高灵敏度的检测产品，帮助科研人员高效、准确地进行实验。