琼脂糖凝胶电泳是一种利用琼脂或琼脂糖作为支持介质的电泳技术，广泛应用于生物医学领域。对于如大分子核酸、病毒等高分子量样品，通常会使用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。以下是关于琼脂糖凝胶电泳的一些常见问题及注意事项，以帮助科研人员在实验中取得更准确的结果。

常见问题与解决方案

1. DNA带模糊及降解：确保电泳缓冲液不受核酸酶污染。此外，注意电泳缓冲液的使用时间，避免由于离子强度下降和pH值上升而影响实验，建议定期更换电泳缓冲液。

2. 电泳条件不适宜：电泳时电压不应超过20V/cm，温度保持在<30℃；对于超大DNA链，温度应控制在<15℃。

3. DNA加载过量：适当减少凝胶中的DNA加载量，以确保更清晰的条带形成。

4. 盐分过高：在电泳前通过乙醇沉淀去除样品中的多余盐分，以得到更好的电泳结果。

5. 蛋白污染：采用酚抽提法去除样品中的蛋白质，以避免影响迁移结果。

提升电泳效果的小技巧

- 对λ/HindⅢ片段的复性：在电泳前，先将DNA加热至65℃并保持5分钟，然后立即放入冰上冷却5分钟。

- 避免DNA降解：通过稀释DNA到20mM NaCl缓冲液，且不要在电泳前加热。

- 缺少条带或弱条带：可以尝试增加DNA的上样量，同时考虑改用聚丙烯酰胺凝胶电泳以提高灵敏度。

实验室管理与注意事项

在琼脂糖凝胶电泳实验中，还需留意以下几点以确保实验顺利进行：

1. 试剂有效性：关键试剂如引物、酶和超纯水需确保未被污染。建议将其妥善存放，标记个人信息，以免在实验室中被误用。

2. PCR体系的设置：尽量使用经过验证的成熟体系，以减少实验变异。

3. 提前准备凝胶：在PCR开始时即可准备凝胶，确保上样孔的整齐和规则。如果需在第二天进行电泳，请将PCR样本存放于4℃并在使用前预先将凝胶冷却25分钟。

4. 使用排枪上样：使用排枪可以快速且均匀地将样本加到凝胶孔中，为保证结果，建议选用进口枪头。

5. 定期更换缓冲液：无论电泳室的使用频率高低，每次进行琼脂糖凝胶电泳时都应更换电泳液，以避免形成不必要的“＾”形条带，提高实验结果的可靠性。同时，可以探索使用PG电子相关的技术产品，以进一步提升实验的精准度和效果。